歡迎您來到拓赫機(jī)電科技(上海)有限公司網(wǎng)站!
激光共聚焦實(shí)驗(yàn)的樣品準(zhǔn)備方法對比
——無需細(xì)胞爬片的樣品準(zhǔn)備新方法 VS 傳統(tǒng)方法
激光共聚焦顯微鏡可以觀察到細(xì)胞內(nèi)已經(jīng)標(biāo)記好的蛋白質(zhì)和分子,為生物學(xué)研究提供了更直觀的觀測方法。如今,激光共聚焦成像已經(jīng)是一個非常常規(guī)的實(shí)驗(yàn)操作,應(yīng)用于生物學(xué)各個研究領(lǐng)域中。
在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,如果要進(jìn)行一次激光共聚焦成像,除了要知道相關(guān)的顯微鏡參數(shù)設(shè)置和操作以外,樣品的準(zhǔn)備也是非常重要的一環(huán)。
傳統(tǒng)方法
由于激光共聚焦實(shí)驗(yàn)對觀測耗材的底部有著比較高的要求,普通的培養(yǎng)皿,培養(yǎng)板或者培養(yǎng)瓶都不能直接用于激光共聚焦成像。
1.比較常用的是使用170μm左右厚度的蓋玻片作為激光共聚焦成像的細(xì)胞載體。但是使用蓋玻片,在實(shí)驗(yàn)操作上是非常麻煩的,如果買的是國產(chǎn)的蓋玻片,首先要做的一步是將蓋玻片清洗并且烘干滅菌,才能開始使用。
2.進(jìn)口的細(xì)胞爬片,雖然不需要清洗,但是還是需要進(jìn)行包被才能讓細(xì)胞正常貼壁生長。通常是將處理好爬片直接放在多孔板中,然后鋪細(xì)胞,熒光染色后,再用鑷子將爬片拿出,反過來放在滴有封片劑(甘油配置)的載玻片上,再進(jìn)行成像。如圖一所示:
圖一:使用蓋玻片和細(xì)胞爬片的做免疫熒光方法示意圖。
操作流程:
無需爬片的新方法
這里要介紹的新方法,大大簡化了樣品準(zhǔn)備流程,需要用到專為共聚焦實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的共聚焦培養(yǎng)皿,這里以德國ibidi的共聚焦培養(yǎng)皿為例(81156,德國ibidi)進(jìn)行說明。共聚焦培養(yǎng)皿的底部是聚合物材質(zhì),具有親水表面,讓大多數(shù)種類的細(xì)胞都可以直接貼壁,無需另外進(jìn)行包被;同時,它們的底部符合蓋玻片標(biāo)準(zhǔn)——只有180µm的厚度,在折射率,阿貝系數(shù)上,它們的性能和標(biāo)準(zhǔn)爬片一致,再加上極低的自發(fā)熒光和細(xì)胞可以直接貼壁的特性,使它們成為共聚焦成像的培養(yǎng)皿。
所有的操作都在培養(yǎng)皿中進(jìn)行,不再需要鑷子以及繁瑣的清洗,滅菌,包被程序(流程如圖二所示)
圖二:共聚焦培養(yǎng)皿的準(zhǔn)備樣品流程,可以直接進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)-染色-成像操作(圖中為德國ibidi 81156培養(yǎng)皿)
操作流程
使用共聚焦培養(yǎng)皿還有個好處:往往一個共聚焦掃描成像持續(xù)時間很長,培養(yǎng)皿中的液體非常容易揮發(fā),共聚焦培養(yǎng)皿有皿蓋,可以減少揮發(fā);比如上述提到的ibidi共聚焦培養(yǎng)皿,有個巧妙的鎖扣設(shè)計(jì),可以扣緊培養(yǎng)皿,保證在共聚焦成像的過程中,皿中的液體不會揮發(fā)(圖三)。
圖三:ibidi共聚焦培養(yǎng)皿的鎖扣設(shè)計(jì)
方法優(yōu)勢總結(jié)
1.一個培養(yǎng)皿完成細(xì)胞培養(yǎng)-染色-成像等系列操作,無需包被,無需爬片,操作簡便;
2.在培養(yǎng)皿里的操作對于操作技術(shù)的要求相對更低,也更便捷;
3.培養(yǎng)皿可使用皿蓋減少蒸發(fā),杜絕揮發(fā)對成像的影響。